В историческом здании, в котором располагалась коллекция основателя галереи Павла Михайловича Третьякова (с 1856 года), посетители могут увидеть постоянную экспозицию музея, состоящую более чем из 1300 произведений русского искусства XI – начала ХХ века, – от домонгольских икон и мозаик до пейзажной, портретной и исторической живописи, в том числе такие шедевры мирового значения, как «Спас Нерукотворный» (новгородская икона XII века) и «Явление Христа народу» Александра Иванова.
Многогранно представлено творчество великих художников Василия Ивановича Сурикова, Василия Васильевича Верещагина, Ильи Ефимовича Репина, Валентина Александровича Серова и других.